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微生物常見檢測(cè)方案

時(shí)間:2022-12-15 點(diǎn)擊次數(shù):1796

     微生物檢測(cè)常見的方法有:生長(zhǎng)量測(cè)定法、微生物計(jì)數(shù)法、生理指標(biāo)法和商業(yè)化快速微生物檢測(cè)等,本文列舉了一些常用檢測(cè)方法的的原理、應(yīng)用范圍和優(yōu)缺點(diǎn)。


      微生物生長(zhǎng)意味著原生質(zhì)含量的增加,所以測(cè)定的方法也都直接或間接的以次為根據(jù),而測(cè)定繁殖則都要建立在計(jì)數(shù)這一基礎(chǔ)上。微生物生長(zhǎng)的衡量,可以從其重量,體積,密度,濃度,做指標(biāo)來(lái)進(jìn)行衡量。


一、生長(zhǎng)量測(cè)定法

1、體積測(cè)量法:又稱測(cè)菌絲濃度法。

原理:通過(guò)測(cè)定一定體積培養(yǎng)液中所含菌絲的量來(lái)反映微生物的生長(zhǎng)狀況。菌絲濃度測(cè)定法是大規(guī)模工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)上微生物生長(zhǎng)的一個(gè)重要監(jiān)測(cè)指標(biāo)。這種方法比較粗放,簡(jiǎn)便,快速,但需要設(shè)定一致的處理?xiàng)l件,否則偏差很大,由于離心沉淀物中夾雜有一些固體營(yíng)養(yǎng)物,結(jié)果會(huì)有一定偏差。


2、稱干重法:

原理:利用離心或過(guò)濾法測(cè)定。一般干重為濕重的10-20%。稱干重發(fā)法較為煩瑣,通常獲取的微生物產(chǎn)品為菌體時(shí),常采用這種方法,如活性干酵母(activity  dry  yeast, ADY),一些以微生物菌體為活性物質(zhì)的飼料和肥料。


3、比濁法:

原理:微生物的生長(zhǎng)引起培養(yǎng)物混濁度的增高。通過(guò)紫外分光光度計(jì)測(cè)定一定波長(zhǎng)下的吸光值,判斷微生物的生長(zhǎng)狀況。該法主要用于發(fā)酵工業(yè)菌體生長(zhǎng)監(jiān)測(cè)。


4、菌絲長(zhǎng)度測(cè)量法:

方法:對(duì)于絲狀真菌和一些放線菌,可以在培養(yǎng)基上測(cè)定一定時(shí)間內(nèi)菌絲生長(zhǎng)的長(zhǎng)度。


二、微生物計(jì)數(shù)法

1、血球計(jì)數(shù)板法:

這種方法簡(jiǎn)便,直觀,快捷,但只適宜于單細(xì)胞狀態(tài)的微生物或絲狀微生物所產(chǎn)生的孢子進(jìn)行計(jì)數(shù),并且所得結(jié)果是包括死細(xì)胞在內(nèi)的總菌數(shù)。


2、染色計(jì)數(shù)法:

為了彌補(bǔ)一些微生物在油鏡下不易觀察計(jì)數(shù),而直接用血球計(jì)數(shù)板法又無(wú)法區(qū)分死細(xì)胞和活細(xì)胞的不足,人們發(fā)明了染色計(jì)數(shù)法。


3、比例計(jì)數(shù)法:

將已知顆粒(如霉菌孢子或紅細(xì)胞)濃度的液體與一待測(cè)細(xì)胞濃度的菌液按一定比例均勻混合,在顯微鏡視野中數(shù)出各自的數(shù)目,即可得未知菌液的細(xì)胞濃度。


4、液體稀釋法:

對(duì)未知菌樣做連續(xù)十倍系列稀釋,根據(jù)估計(jì)數(shù),從最適宜的三個(gè)連續(xù)的10倍稀釋液中各取5毫升試樣,接種1毫升到3組共15只裝培養(yǎng)液的試管中,經(jīng)培養(yǎng)后記錄每個(gè)稀釋度出現(xiàn)生長(zhǎng)的試管數(shù),然后查最大或然數(shù)表MPN(most probably number)得出菌樣的含菌數(shù),根據(jù)樣品稀釋倍數(shù)計(jì)算出活菌含量。該法常用于食品中微生物的檢測(cè),例如飲用水和牛奶的微生物檢查。


5、平板菌落計(jì)數(shù)法:

這是一種常用的活菌計(jì)數(shù)法。但方法比較麻煩,操作者需有熟練的技術(shù)。平板菌落計(jì)數(shù)法不僅可以得出菌液中活菌的含菌數(shù),而且同時(shí)將菌液中的細(xì)菌進(jìn)行了一次分離培養(yǎng),獲得了單克隆。


6、試劑紙法:

在平板計(jì)數(shù)法的基礎(chǔ)上,發(fā)展了小型商品化產(chǎn)品以供快速計(jì)數(shù)用。試劑紙法計(jì)數(shù)快捷準(zhǔn)確,相比而言避免了平板計(jì)數(shù)法的人為操作誤差。


7、膜過(guò)濾法:

用特殊的濾膜過(guò)濾一定體積的含菌樣品,經(jīng)丫叮橙染色,在紫外顯微鏡下觀察細(xì)胞的熒光,活細(xì)胞會(huì)發(fā)橙色熒光,而死細(xì)胞則發(fā)綠色熒光。


三、生理指標(biāo)法

微生物的生長(zhǎng)伴隨著一系列生理指標(biāo)發(fā)生變化,例如酸堿度,發(fā)酵液中的含氮量,含糖量,產(chǎn)氣量等,與生長(zhǎng)量相平行的生理指標(biāo)很多,它們可作為生長(zhǎng)測(cè)定的相對(duì)值。


1、測(cè)定含氮量:

大多數(shù)細(xì)菌的含氮量為干重的12.5%,酵母為7.5%,霉菌為6.0%。根據(jù)含氮量×6.25,即可測(cè)定粗蛋白的含量。含氮量的測(cè)定方法有很多,如用硫酸,過(guò)氯酸,碘酸,磷酸等消化法和Dumas測(cè)氮?dú)夥ā?/span>


2、測(cè)定含碳量:

將少量(干重0.2-2.0 mg)生物材料混入1毫升水或無(wú)機(jī)緩沖液中,用2毫升2%的K2Cr2O7溶液在100 0C下加熱30分鐘后冷卻。加水稀釋至5毫升,在580nm的波長(zhǎng)下讀取吸光光度值,即可推算出生長(zhǎng)量。需用試劑做空白對(duì)照,用標(biāo)準(zhǔn)樣品做標(biāo)準(zhǔn)曲線。


3、還原糖測(cè)定法:

還原糖通常是指單糖或寡糖,可以被微生物直接利用,通過(guò)還原糖的測(cè)定可間接反映微生物的生長(zhǎng)狀況,常用于大規(guī)模工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)上微生物生長(zhǎng)的常規(guī)監(jiān)測(cè)。


4、氨基氮的測(cè)定:

方法是,離心發(fā)酵液,取上清液,加入甲基紅和鹽酸作指示劑,加入0.02N的NaOH調(diào)色至顏色剛剛褪去,加入底物18%的中性甲醛,反應(yīng)數(shù)刻,加入0.02N的使之變色,根據(jù)NaOH的用量折算出氨基氮的含量。根據(jù)培養(yǎng)液中氨基氮的含量,可間接反映微生物的生長(zhǎng)狀況。


5、其他生理物質(zhì)的測(cè)定:

P,DNA,RNA,ATP,NAM(乙酰胞壁酸)等含量以及產(chǎn)酸,產(chǎn)氣,產(chǎn)CO2(用標(biāo)記葡萄糖做基質(zhì)),耗氧,黏度,產(chǎn)熱等指標(biāo), 都可用于生長(zhǎng)量的測(cè)定。也可以根據(jù)反應(yīng)前后的基質(zhì)濃度變化,最終產(chǎn)氣量,微生物活性三方面的測(cè)定反映微生物的生長(zhǎng)。


四、商業(yè)化快速微生物檢測(cè)法

       微生物的檢測(cè),其發(fā)展方向是快速,準(zhǔn)確,簡(jiǎn)便,自動(dòng)化,當(dāng)前很多生物制品公司利用傳統(tǒng)微生物檢測(cè)原理,結(jié)合不同的檢測(cè)方法,設(shè)計(jì)了形式各異的微生物檢測(cè)儀器設(shè)備,正逐步廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)微生物檢測(cè)和科學(xué)研究領(lǐng)域。這些儀器和設(shè)備的生產(chǎn)廠家很多,產(chǎn)品各異,在此不做一一介紹,具體可查看各公司的產(chǎn)品說(shuō)明。


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